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研域解析：酶符号抗体的制备办法
发布时间： 2020-02-14 点击次数： 1610次酶符号抗体的制备办法主要有两种，即戊二醛交联法和过碘酸盐氧化法。
（1）戊二醛交联法：戊二醛是一种双功用团试剂，它可以使酶与蛋白质的氨基通过它而联合。碱性磷酸一般用此法进行符号。交联办法一步法、两步法两种。在一步法中戊二醛直接参加酶与抗体的混合物中，反应后即得酶符号抗体。
ELISA中常用的酶一般都用此法交联。它具有操作简洁、有效（结合率达60%-70%）和重复性好等优点。缺点是交联反应是随机的，酶与抗体交联时分子间的份额不严格，结合物的巨细也不均一，酶与酶，抗体与抗体之间也有或许交联，影响效果。两步法的产品中绝大部分的酶与蛋白质是以1:1的份额结合的，较一步法的酶结合物更有助于本底的改进以提高敏感度，但其偶联的有效率较一步法低。
（2）过碘酸盐氧化法：本法只适用于含糖量较高的酶。辣根过氧化物酶的符号常用此法。反应时，过碘酸钠将HRP分子外表的多糖氧化为醛基很活泼，可与蛋白质上的氨基构成Schiff氏碱而结合。
按以上办法制备的酶结合物一般都混有未结合物的酶和抗体。理论上，结合物中混有的游离酶一般不影响ELISA中zui后的酶活性测定，因通过*洗涤，游离酶可被除掉，并不影响显色。但游离的抗体则不同，它会与酶标抗体竞争相应的固相抗原，从而减少了断合到固相上的酶标抗体的量。- 上一篇：如何区分ELISA试剂盒是否造假
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