上海研域-ELISA试剂实验细节盘点

ELISA细节盘点

1. 样本收集

每个标本量收集体积=100ulx检测指标，如要做复孔，标本量收集体积=10Oul×检测指标×2。对收集后当天进行检测的标本，储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，将标本及时分装后放在-20°℃或-70°℃条件下保存，避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时，-20°℃可保存1个月。-70度可保存6个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。如需离心的样本，离心转速不宜过高(2000~3000)

2. ELISA加样

加样品时，单孔用量要求: ≥50ul/指标，如需要做2个复孔则血量≥100ul/指标。如果样本量不充足，具体用量可咨询您的专属销售。

3. 样品捕获抗体孵育

37C恒温孵育，避免温度变化过大

4. 洗涤

机洗: 将25x×洗涤缓冲液稀释成1×，1×洗涤缓冲液洗三次，每次加300uL浸泡60s手洗:手洗次数应比机洗次数多，浸泡时间也应适当延长

手洗容易导致吸附在酶标板底部的试剂脱落，从而导致结果偏小，手洗次数过多也会影响实验结果，建议机洗

5. 底物显色（TMB显色) 孵育

TMB在使用前应放置室温平衡30分钟，加的量为A、B各50uL

6. ELISA终止液终止反应

加完TMB终止液应让其混匀再在酶标仪上读数

7. 酶标仪读数

在450nm波长处测定O.D值

8. 根据O.D值计算样本浓度

使用软件拟合标准曲线，根据标准曲线的拟合度(r或R2）以及残差平方和（s）选择合适的曲线。

上海研域生物有限公司，生命科学和生物医学域十余年，是集研发、生产、销售于一体的专业生物公司。公司目前可以提供多种生物学检测试剂盒、进口常规生化ELISA试剂、抗体、标准品、血清等产品。如果您有实验方面的需求和问题，都可以联系我们，欢迎咨询。